摘要本研究聚焦桑樹查爾酮異構(gòu)酶（CHI）基因，通過RT-PCR技術(shù)從桑樹葉片中克隆獲得Morus_CHI基因全長cDNA序列。借助威尼德GenePulserX2雙波全能型電穿孔儀，將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)，分析該基因在不同組織及脅迫處理下的表達(dá)特性，為桑樹次生代謝調(diào)控研究提供理論依據(jù)。引言查爾酮異構(gòu)酶（CHI）是黃酮類化合物合成途徑中的關(guān)鍵酶，在植物抗逆響應(yīng)與藥用成分合成中具有重要作用。桑樹作為藥食同源植物，其CHI基因的功能解析對挖掘黃酮類活性成分合成機(jī)...

摘要人源氨肽酶N（hAPN）在腫瘤侵襲、病毒感染等生理病理過程中具關(guān)鍵作用。本研究通過RT-PCR克隆hAPN全長編碼區(qū)，構(gòu)建pET-32a重組載體，借助威尼德MiniPulser399經(jīng)濟(jì)款電穿孔儀優(yōu)化大腸桿菌BL21轉(zhuǎn)化條件，實(shí)現(xiàn)hAPN在原核系統(tǒng)中的高效可溶性表達(dá)，為酶學(xué)特性分析及靶向藥物研發(fā)提供標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)方案。引言人源氨肽酶N作為鋅離子依賴性蛋白酶，廣泛參與細(xì)胞外基質(zhì)降解、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及病原識別等重要生物學(xué)過程。其異常表達(dá)與多種惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，同時作為冠狀病毒...

摘要本研究聚焦馬鈴薯抗逆相關(guān)WRKY6基因，通過RT-PCR技術(shù)克隆目的基因，構(gòu)建pET-28a重組表達(dá)載體，借助威尼德GenePulserX2雙波全能型電穿孔儀優(yōu)化農(nóng)桿菌GV3101轉(zhuǎn)化體系，實(shí)現(xiàn)WRKY6蛋白在擬南芥原生質(zhì)體中的高效瞬時表達(dá)，為解析馬鈴薯逆境響應(yīng)分子機(jī)制及抗逆品種改良提供關(guān)鍵靶標(biāo)與技術(shù)支撐。引言馬鈴薯作為全球重要的糧菜兼用作物，其產(chǎn)量與品質(zhì)受干旱、鹽漬等逆境脅迫影響顯著。WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族在植物抗逆信號通路中扮演核心調(diào)控角色，其中WRKY6基因被證實(shí)參與...

摘要本研究針對豬流行性腹瀉病毒（PEDV）M基因片段開展原核表達(dá)研究。通過RT-PCR擴(kuò)增目的片段，構(gòu)建pET-32a重組載體，借助威尼德GenePulser630指數(shù)衰減波電穿孔儀優(yōu)化大腸桿菌Rosetta(DE3)轉(zhuǎn)化條件，實(shí)現(xiàn)M蛋白高效可溶性表達(dá)，為PEDV診斷抗原制備及疫苗研發(fā)提供關(guān)鍵技術(shù)支撐。引言豬流行性腹瀉（PED）是由PEDV引發(fā)的急性腸道傳染病，嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)。病毒膜蛋白（M蛋白）作為病毒結(jié)構(gòu)的核心組分，其原核表達(dá)產(chǎn)物在病毒檢測試劑開發(fā)及亞單位疫苗研究中具...

摘要本研究針對茶樹黃酮醇合成酶基因開展克隆及原核表達(dá)分析。通過RT-PCR從龍井43茶樹葉片中獲取目的基因，構(gòu)建pET-28a重組表達(dá)載體，利用威尼德GenePulser830方波型電穿孔儀轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，實(shí)現(xiàn)目的蛋白高效誘導(dǎo)表達(dá)，為茶樹次生代謝調(diào)控研究提供技術(shù)支撐。引言黃酮醇作為茶樹次生代謝的重要產(chǎn)物，其合成通路關(guān)鍵酶——黃酮醇合成酶（FLS）的編碼基因挖掘，對解析茶葉品質(zhì)形成機(jī)制及分子育種具有重要意義。目前植物源FLS基因的原核表達(dá)常受限于轉(zhuǎn)化效率與蛋白可...

摘要本研究系統(tǒng)探討siRNA濃度梯度對微血管內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率及細(xì)胞活性的影響規(guī)律。采用威尼德GenePulser630指數(shù)衰減波電穿孔儀，結(jié)合某品牌高純度siRNA試劑，建立標(biāo)準(zhǔn)化轉(zhuǎn)染體系。通過流式細(xì)胞術(shù)與熒光定量PCR驗(yàn)證，0.5-2.0μM濃度區(qū)間呈現(xiàn)顯著劑量依賴性效應(yīng)，為血管生物學(xué)研究提供精準(zhǔn)轉(zhuǎn)染策略。引言微血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管穩(wěn)態(tài)調(diào)控的核心單元，其基因功能研究對血管新生、炎癥反應(yīng)等病理機(jī)制解析具有重要價值。傳統(tǒng)化學(xué)轉(zhuǎn)染法在該細(xì)胞系中普遍存在效率低下（材料與方法2.1實(shí)...

摘要本研究通過系統(tǒng)優(yōu)化電穿孔轉(zhuǎn)染參數(shù)，建立穩(wěn)定的大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞siRNA遞送體系。采用威尼德GenePulser830方波型電穿孔儀配合某品牌轉(zhuǎn)染試劑，實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率達(dá)89.7%±3.2，細(xì)胞存活率維持在83.5%±4.1。實(shí)驗(yàn)證實(shí)該組合在基因沉默效率、細(xì)胞相容性及實(shí)驗(yàn)重復(fù)性方面具有顯著優(yōu)勢，為血管生物學(xué)研究提供可靠技術(shù)平臺。引言血管內(nèi)皮細(xì)胞功能調(diào)控研究是心血管疾病機(jī)制探索的重要方向。siRNA技術(shù)因其高特異性成為關(guān)鍵研究工具，但傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法存在效...

摘要本研究通過對比脂質(zhì)體法、陽離子聚合物法及電穿孔法在C6/36蚊細(xì)胞中的siRNA遞送效率，建立標(biāo)準(zhǔn)化評價體系。結(jié)果顯示，基于某品牌威尼德GenePulserX2雙波全能型電穿孔儀的實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染效率達(dá)(92.3±1.8)%，顯著優(yōu)于傳統(tǒng)方法（p引言蚊細(xì)胞系作為蟲媒病毒研究的核心模型，其siRNA轉(zhuǎn)染效率直接影響基因沉默效果。傳統(tǒng)脂質(zhì)體法存在細(xì)胞毒性大（存活率通常材料與方法2.1細(xì)胞培養(yǎng)體系C6/36細(xì)胞（白紋伊蚊胚胎細(xì)胞系）于28℃無CO?培養(yǎng)箱中，采用Leib...