摘要通過(guò)威尼德電穿孔儀優(yōu)化轉(zhuǎn)染參數(shù)，實(shí)現(xiàn)外源基因高效導(dǎo)入大鼠肌衛(wèi)星細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，電穿孔電壓260V、脈沖時(shí)長(zhǎng)5ms時(shí)轉(zhuǎn)染效率達(dá)68.5%，細(xì)胞存活率80%。Westernblot證實(shí)目的蛋白穩(wěn)定表達(dá)，表明該方法具有可行性，為肌肉再生研究提供技術(shù)支持。引言骨骼肌損傷修復(fù)依賴肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖與分化能力，而基因編輯技術(shù)是調(diào)控其功能的重要手段。傳統(tǒng)化學(xué)轉(zhuǎn)染法存在效率低、細(xì)胞毒性強(qiáng)等問(wèn)題，病毒載體則伴隨生物安全風(fēng)險(xiǎn)。電穿孔技術(shù)通過(guò)瞬時(shí)電場(chǎng)改變細(xì)胞膜通透性，具有操作簡(jiǎn)便、適用范圍廣...

摘要優(yōu)化植物熒光原位雜交（FISH）技術(shù)體系，結(jié)合威尼德電穿孔儀、紫外交聯(lián)儀等先進(jìn)設(shè)備，實(shí)現(xiàn)了高分辨率染色體標(biāo)記與基因組多態(tài)性分析。實(shí)驗(yàn)以模式植物擬南芥為材料，采用某試劑完成探針標(biāo)記與信號(hào)擴(kuò)增，顯著提升了雜交效率與信噪比。結(jié)果表明，改進(jìn)后的技術(shù)可精準(zhǔn)解析復(fù)雜基因組結(jié)構(gòu)，為植物遺傳進(jìn)化研究提供可靠工具。引言熒光原位雜交（FISH）技術(shù)自20世紀(jì)80年代問(wèn)世以來(lái)，已成為染色體水平基因組分析的核心手段。傳統(tǒng)FISH依賴放射性標(biāo)記，存在操作復(fù)雜、分辨率低等缺陷。隨著分子探針設(shè)計(jì)、熒光...

摘要生物素標(biāo)記馬鈴薯紡錘塊莖類(lèi)病毒（PSTVd）互補(bǔ)DNA探針，結(jié)合威尼德分子雜交儀等設(shè)備，系統(tǒng)分析了探針與靶標(biāo)RNA的特異性結(jié)合機(jī)制。實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了探針標(biāo)記效率、雜交條件及信號(hào)檢測(cè)方法，證實(shí)生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)可顯著提高檢測(cè)靈敏度（信噪比15:1）。研究結(jié)果為類(lèi)病毒檢測(cè)技術(shù)的開(kāi)發(fā)提供了理論支持，適用于農(nóng)業(yè)病原體的精準(zhǔn)診斷。引言馬鈴薯紡錘塊莖類(lèi)病毒（PSTVd）是嚴(yán)重危害茄科作物的病原體，其檢測(cè)依賴高靈敏的核酸雜交技術(shù)。傳統(tǒng)放射性標(biāo)記探針存在安全隱患，而digaoxin等非放射...

摘要在探究早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子1（EGR1）對(duì)顆粒細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制及其在卵巢衰老中的作用。通過(guò)構(gòu)建卵巢衰老模型，結(jié)合基因沉默與過(guò)表達(dá)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)EGR1通過(guò)激活線粒體凋亡通路促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡，加速卵巢功能衰退。研究結(jié)果為延緩卵巢衰老提供了潛在分子靶點(diǎn)。引言卵巢衰老是女性生殖系統(tǒng)功能衰退的核心標(biāo)志，其機(jī)制與顆粒細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。顆粒細(xì)胞作為卵泡微環(huán)境的關(guān)鍵組分，其存活狀態(tài)直接影響卵母細(xì)胞發(fā)育及激素分泌。EGR1作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，已被報(bào)道參與多種組織凋亡過(guò)程，但其在卵巢衰老中的作用尚...

摘要通過(guò)體外分離培養(yǎng)蒙古綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、免疫熒光染色及功能分析，系統(tǒng)評(píng)估其增殖、遷移及分子特性。采用威尼德電穿孔儀及紫外交聯(lián)儀優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，結(jié)合某試劑完成細(xì)胞標(biāo)記與基因表達(dá)檢測(cè)。結(jié)果顯示，原代細(xì)胞高表達(dá)滋養(yǎng)層標(biāo)志物CDX2、KRT7，且具備侵襲與激素分泌功能。該模型為綿羊胚胎發(fā)育研究提供了可靠工具。引言絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞是胎盤(pán)形成的關(guān)鍵組分，參與胚胎著床、母胎物質(zhì)交換及免疫調(diào)節(jié)。蒙古綿羊作為高適應(yīng)性畜種，其胎盤(pán)發(fā)育機(jī)制研究對(duì)畜牧繁殖及生殖醫(yī)學(xué)具有重要意義。...

摘要腺病毒載體介導(dǎo)的乳鐵蛋白（LF）過(guò)表達(dá)對(duì)宮頸癌干細(xì)胞（CCSCs）增殖的抑制作用及分子機(jī)制。通過(guò)構(gòu)建Ad5-LF腺病毒載體并轉(zhuǎn)染CCSCs，利用Westernblot、qPCR及功能實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證LF表達(dá)及生物學(xué)效應(yīng)。結(jié)果顯示，LF過(guò)表達(dá)顯著抑制CCSCs增殖并誘導(dǎo)凋亡，其機(jī)制與Wnt/β-catenin通路抑制相關(guān)。本研究為靶向?qū)m頸癌干細(xì)胞的基因治療提供理論依據(jù)。引言宮頸癌是全球女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移與宮頸癌干細(xì)胞（CCSCs）的耐藥性和自我更新能力密切相關(guān)。乳鐵...

摘要通過(guò)優(yōu)化電穿孔參數(shù)與精子預(yù)處理方法，成功建立了小鼠精子核內(nèi)基因高效轉(zhuǎn)染技術(shù)體系。利用威尼德電穿孔儀結(jié)合熒光標(biāo)記示蹤，揭示了轉(zhuǎn)染過(guò)程中DNA-核蛋白復(fù)合體動(dòng)態(tài)組裝規(guī)律，并發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性DNA修復(fù)通路參與外源基因整合。實(shí)驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染效率達(dá)72.3%，胚胎發(fā)育率提升至65%，為生殖細(xì)胞基因編輯提供了新策略。引言生殖細(xì)胞基因編輯技術(shù)是遺傳疾病治療與動(dòng)物模型構(gòu)建的核心工具。傳統(tǒng)顯微注射法存在操作復(fù)雜、胚胎損傷率高等缺陷，而基于精子的基因遞送因其非侵入性備受關(guān)注。然而，精子核膜屏障及染色質(zhì)...

摘要研究通過(guò)構(gòu)建EGFP報(bào)告基因質(zhì)粒，結(jié)合體內(nèi)電穿孔轉(zhuǎn)染技術(shù)，利用威尼德電穿孔儀對(duì)小鼠肝臟組織進(jìn)行定向基因遞送。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)靶基因表達(dá)水平，結(jié)合組織切片熒光成像驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果表明，優(yōu)化電穿孔參數(shù)后，EGFP在肝細(xì)胞中的表達(dá)效率顯著提高（p引言基因轉(zhuǎn)染技術(shù)是研究基因功能及開(kāi)發(fā)基因治療策略的核心手段。然而，體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率受遞送方式、組織屏障及免疫清除等多因素限制，亟需建立精準(zhǔn)的定量評(píng)估體系。傳統(tǒng)方法如Westernblot或免疫組化存在靈敏度低、操作繁瑣等問(wèn)題。實(shí)...