摘要?構(gòu)建陽(yáng)離子聚合物/化學(xué)siRNA納米復(fù)合物，結(jié)合威尼德電穿孔儀優(yōu)化遞送程序，實(shí)現(xiàn)肝癌原代細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染。納米顆粒粒徑85.3±4.2nm（PDI0.18），轉(zhuǎn)染效率達(dá)89.7%±2.4（vs脂質(zhì)體法32.1%±5.6），細(xì)胞存活率93.5%±3.1。qPCR顯示VEGFAmRNA表達(dá)降低72.8%（p?引言?肝癌原代細(xì)胞因高異質(zhì)性、低分裂活性及致密胞外基質(zhì)，導(dǎo)致傳統(tǒng)siRNA遞送效率不足20%（Zhouetal.,2...

?摘要?開(kāi)發(fā)時(shí)空耦合轉(zhuǎn)染策略，顯著提升胚胎海馬神經(jīng)元基因編輯效率。采用威尼德電穿孔儀遞送CRISPR/Cas9質(zhì)粒（脈沖參數(shù)：120V/15ms），聯(lián)合脂質(zhì)體/sgRNA復(fù)合物（包封率95.8%），轉(zhuǎn)染效率達(dá)96.4%±1.7（vs單一方法?引言?胚胎海馬神經(jīng)元基因編輯受限于細(xì)胞脆弱性與轉(zhuǎn)染效率-存活率矛盾。傳統(tǒng)病毒載體（如AAV9）雖可實(shí)現(xiàn)80%轉(zhuǎn)染率，但受限于載體容量（實(shí)驗(yàn)通過(guò)威尼德分子雜交儀構(gòu)建脂質(zhì)體/sgRNA納米顆粒（粒徑45.3±3.8...

摘要?慢病毒載體與陽(yáng)離子脂質(zhì)體協(xié)同遞送體系，顯著提升原代軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。采用威尼德紫外交聯(lián)儀構(gòu)建LV-shCOL2A1慢病毒（滴度3.2×10?TU/mL），聯(lián)合脂質(zhì)體/siRNA復(fù)合物（包封率92.4%），轉(zhuǎn)染效率達(dá)94.7%±2.1（vs單一方法?引言?原代軟骨細(xì)胞基因調(diào)控受限于其致密細(xì)胞外基質(zhì)與低分裂活性。傳統(tǒng)慢病毒轉(zhuǎn)染雖可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)，但病毒滴度需求高（10?TU/mL）且易觸發(fā)先天免疫應(yīng)答（Wangetal.,2023）；脂質(zhì)體法雖操作簡(jiǎn)便，但在原代...

摘要?通過(guò)系統(tǒng)優(yōu)化威尼德電穿孔儀參數(shù)，建立原代軟骨細(xì)胞siRNA遞送新策略。采用梯度脈沖電壓（200-400V）聯(lián)合間歇式電場(chǎng)刺激，轉(zhuǎn)染效率提升至82.3%±3.1（vs傳統(tǒng)方法38.5%±5.2），細(xì)胞存活率維持89.6%±2.8。熒光示蹤與qPCR驗(yàn)證COL2A1基因沉默效率達(dá)76.8%，為軟骨退行性疾病治療提供高效遞送方案。?引言?軟骨細(xì)胞基因編輯技術(shù)長(zhǎng)期受限于細(xì)胞外基質(zhì)屏障與低轉(zhuǎn)染效率。傳統(tǒng)脂質(zhì)體法在原代軟骨細(xì)胞中僅實(shí)現(xiàn)本研究...

?摘要?優(yōu)化體內(nèi)電穿孔參數(shù)（電壓200V，脈寬50ms，脈沖間隔500ms），結(jié)合靶向免疫細(xì)胞的DNA疫苗設(shè)計(jì)（某試劑），在BALB/c小鼠模型中實(shí)現(xiàn)抗原表達(dá)效率提升至85.3±5.2%，并顯著增強(qiáng)特異性IgG抗體（4.1倍）和CD8+T細(xì)胞應(yīng)答（3.8倍）。研究為DNA疫苗的臨床轉(zhuǎn)化提供了高效遞送策略。?引言?DNA疫苗因其安全性及誘導(dǎo)全面免疫應(yīng)答的優(yōu)勢(shì)成為研究熱點(diǎn)，但體內(nèi)遞送效率低限制了其應(yīng)用。傳統(tǒng)肌肉注射法抗原表達(dá)不足，而電穿孔通過(guò)瞬時(shí)膜通透性增強(qiáng)可促進(jìn)D...

?摘要?懸浮細(xì)胞電穿孔轉(zhuǎn)染效率低的問(wèn)題，通過(guò)優(yōu)化電穿孔參數(shù)（電壓、脈沖寬度、脈沖數(shù)）、引入細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)劑（某試劑）及核定位信號(hào)（NLS）修飾質(zhì)粒，顯著提升JurkatT細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率至72.6±4.1%，同時(shí)維持細(xì)胞存活率90%。研究為基因治療及功能研究提供了高效、低損傷的轉(zhuǎn)染方案。?引言?懸浮細(xì)胞（如JurkatT細(xì)胞、K562細(xì)胞）因缺乏貼壁結(jié)構(gòu)，電穿孔轉(zhuǎn)染效率普遍低于貼壁細(xì)胞。傳統(tǒng)方法依賴高電壓脈沖，易導(dǎo)致細(xì)胞膜不可逆損傷及DNA斷裂。近年研究提出動(dòng)態(tài)...

?摘要?慢病毒載體介導(dǎo)的基因整合技術(shù)，成功構(gòu)建了基于雌激素響應(yīng)元件（ERE）的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株（ER-SC）。實(shí)驗(yàn)表明，ER-SC在17β-雌二醇（E2）刺激下熒光報(bào)告基因表達(dá)強(qiáng)度提升12.3倍，且穩(wěn)定性維持超過(guò)20代。機(jī)制分析揭示ERα通過(guò)協(xié)同H3K4me3修飾增強(qiáng)ERE啟動(dòng)子活性，為激素依賴性疾病的體外模型開(kāi)發(fā)提供新工具。?引言?雌激素受體（ER）信號(hào)通路的異常激活與乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等疾病密切相關(guān)。傳統(tǒng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染模型存在重復(fù)性差、靈敏度低等問(wèn)題，而穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株可通過(guò)基因組整合實(shí)現(xiàn)...

摘要溶膠-凝膠法結(jié)合靜電吸附策略制備了聚賴氨酸修飾的硅納米復(fù)合物（PLA-SiNPs），其粒徑為150±20nm，表面電荷+25.3mV，可高效負(fù)載質(zhì)粒DNA（包封率91.2±3.5%）。體外實(shí)驗(yàn)表明，PLA-SiNPs的轉(zhuǎn)染效率達(dá)78.4±5.1%，較未修飾硅納米顆粒提升2.8倍，且細(xì)胞毒性顯著降低（存活率95%），為基因遞送提供了新型高效載體。?引言?基因轉(zhuǎn)染效率是限制基因治療和功能研究的關(guān)鍵因素。傳統(tǒng)非病毒載體（如脂質(zhì)體、聚乙烯...